Dimorphism in body size and blood cells of the Middle Eastern tree frog, Hyla savignyi (Amphibia: Hylidae) in Kohgilouye & Boyer Ahmad Province, South of Iran

Document Type : Research Paper

Authors
1 Department of Biology, Faculty of Science, Yasouj University, Yasouj, Iran
2 Department of Biology, Faculty of Science, Yasouj University, Yasouj, I.R. of Iran
3 Dept. of Biology, Faculty of Science, Yasouj University, Yasouj, I.R. of Iran
4 Department of Science, Farhangian University, Tehran, Iran.
Abstract
In this study, 67 adult tree frogs, Hyla savignyii, were taken from Dasht-e-Poune and Paddy fields in Lodab region from May 2021 to November 2022, to investigate the hematology of the tree frogs. 11 metric characters were measured using a digital caliper (0.01 mm accuracy) to examin the morphology of male and female frogs. Blood samples were taken from the abdominal vein, smears were prepared, dried at ambient temperature, fixed with methanol, and stained by Giemsa. The blood cells (erythrocytes, leukocytes, and thrombocytes) were investigated under 40x and 100x magnification using an optical microscope. The male and female groups separate from each other in five out of 11 metric characters (p≤0.05). All the six metric characteristics of red blood cells in female frogs are greater than male frogs. Leuckocyte characters are significantly different between sexes with greater values for female group (p≤0.05). Different environmental and gender factors may responsible for cell metric differences between sexes.

Keywords

Subjects


دوشکلی در اندازه بدن و سلول‌های خون قورباغه درختی خاورمیانه Hyla savignyi (Amphibia: Hylidae) در استان کهگیلویه و بویراحمد، جنوب ایران

بهنام پوراسلام فر1، بهزاد فتحی‌نیا1*، آریا شفائی‌پور1 و حسین فراست2

1 ایران، یاسوج، دانشگاه یاسوج، دانشکده علوم پایه، گروه زیست‌شناسی

2  ایران، تهران، دانشگاه فرهنگیان، گروه آموزش زیست‌شناسی

تاریخ دریافت: 28/04/1402             تاریخ پذیرش: 16/09/1402

چکیده

در این مطالعه، در بازه زمانی اردیبهشت‌ماه ۱۴۰۰ تا آبان‌ماه ۱۴۰۱، ۶۷ قورباغه درختی بالغ از دو موقعیت شالیزار و دشت پونه‌ در منطقه لوداب، جهت بررسی ریخت‌شناسی و خون‌شناسی مورد مطالعه قرار گرفتند. برای بررسی ریخت‌شناسی جنس‌های نر و ماده از 11 صفت متریک (اندازشی) استفاده شد. اندازه‌گیری و ثبت این صفات بوسیله‌ی کولیس دیجیتال با دقت 01/0 میلی‌متر انجام شد. نمونه‌های خون از ورید شکمی جمع‌آوری شد. گسترش‌های خون در دمای اتاق خشک گردید، با متانول فیکس شدند و توسط رنگ گیمسا رنگ‌آمیزی شد. گسترش‌ها توسط میکروسکوپ نوری با استفاده از بزرگنمایی 100 و روغن ایمرسیون به‌منظور بررسی و اندازه‌گیری سلول‌های خونی (گلبول‌های قرمز، گلبول‌های سفید و ترومبوسیت) مورد آزمایش قرار گرفتند. طبق نتایج حاصل از این مطالعه، گروه‌های نر و ماده در 5 صفت از 11 صفت مورد مطالعه، از یکدیگر جدا هستند (p < 0.05). همچنین صفات متریک گلبول‌های قرمز در قورباغه‌های ماده نیز در هر شش ویژگی از قورباغه‌های نر بیشتر است (p < 0.05). تمام صفات متریک مورد مطالعه در لنفوسیت‌ها نیز بین دو جنس متفاوت است (p < 0.05). نتایج نشانگر آن است که بین جنس‌های نر و ماده اختلاف‌های معناداری در صفات ریخت‌شناسی سلول‌های خونی وجود دارد و عوامل محیطی و جنسیتی می‌توانند در تعیین این اختلاف‌ها نقش مهمی داشته باشند.

واژه های کلیدی: گلبول‌های قرمز، گلبول‌های سفید، شالیزار، دشت پونه، خون‌شناسی

* نویسنده مسئول، پست الکترونیکی: bfathinia@gmail.com

مقدمه

 

دوزیستان قدمتی بیش از ۳۰۰ میلیون سال دارند و تا به امروز 8500 گونه از آن‌ها توصیف‌شده است (3). قورباغه‌های درختی کوچکترین قورباغه‌های ایران هستند (36)، که اخیراً  براساس برخی مطالعات از جمله آنالیز صوتی و بررسی داده‌های مولکولی به دو گونه Hyla savignyi و Hyla orientalis تفکیک شده‌اند (23). Hyla savignyi عمدتاً در نیمه غربی ایران در استان‌های آذربایجان شرقی و غربی، کردستان، کرمانشاه، ایلام، همدان، خوزستان، فارس و مرکزی از ارتفاع 350  الی 1500 متر از سطح دریا دیده می‌شود (8).

دوشکلی جنسی به تفاوت در اندازه بدن یا ابعاد افراد بالغ گفته می‌شود که در جانوران بی‌مهره و مهره‌دار اثبات گردیده است. امکان اثرگذاری دوشکلی جنسی بر زیستگاه و رفتار حیوانات، بر اهمیت مطالعه‌ی آن برای درک ویژگی‌های زیستی و روش جفت‌گیری می‌افزاید. دو شکلی جنسی در قورباغه‌ها در خیلی از صفات مورفولوژیکی نظیر اندازه بدن، شکل و رنگ‌آمیزی مشهود است (26). یک خصوصیت آشکار که قورباغه‌ها را از سمندر‌ها و سیسیلیان‌ها متمایز می‌کند، دستگاه صوتی در جنس نر می‌باشد (17). در بسیاری از موارد، دلیل تکامل دوشکلی جنسی درگیری افراد یک جنس (عموماً نر‌ها) بر سر افراد جنس مخالف می‌باشد، که این درگیری‌ها میان افراد یک جنس، موفقیت تولیدمثلی را مشخص می‌نماید و موجب انتخاب درون‌جنسی می‌گردد. قابلیت رقابتی نر‌ها مزیتی انتخابی می‌باشد. به دلیل اینکه اندازه بزرگ‌تر نشان‌دهنده‌ موفقیت نر در رقابت با سایر نر‌ها می‌باشد، انتخاب درون‌جنسی قادر است موجب رشد ابعاد بدن در نر‌ها گردد و موجب دوشکلی جنسی با نر‌های بزرگ‌تر از ماده‌ها گردد. در سایر موارد، امکان دارد ماده‌ها از لحاظ اندازه یا دیگر صفات ظاهری، نر‌ها را انتخاب نمایند و این انتخاب ماده نهایتاً منجر به اندازه بزرگ‌تر در جنس نر گردد. با این وجود انتخاب جنسی تنها پارامتر تعیین‌کننده اندازه بدن در هر جنس نیست، مثلاً اندازه بزرگ بدن در افراد ماده به دلیل ارتباط آن با باروری در بسیاری از گونه‌ها انتخاب می‌شود. تفاوت اندازه میان دو جنس ممکن است به دلیل تفاوت در مسیر رشد، سن بلوغ جنسی و الگو‌های مصرف انرژی باشد. تفاوت در اندازه بین نر‌ها و ماده‌ها بیشتر نمایان‌گر ترکیبی از اثرات انتخاب جنسی و انتخاب طبیعی می‌باشد. افراد ماده در نزدیک به 90 درصد از گونه‌های تحت مطالعه دوزیستان بی‌دم بزرگ‌تر از افراد نر‌ می‌باشند (46).

ارزیابی ریخت‌شناسی خون دارای ارزش بالینی بالقوه زیادی در دوزیستان است (22). صفات و پارامتر‌های ریخت‌شناسی خون شاخص‌های قابل توجهی از وضعیت فیزیولوژیکی و سلامتی حیوانات هستند (7، 48). جانوران پر سلولی برای انتقال ذرات غذا و گاز‌های تنفسی به سلول‌های بافتی و انتقال مواد زائد از سلول‌ها به اندام‌های دفعی به سیستم گردش خون نیاز دارند. حفظ ترکیب و سطح ثابت خون که مایع در گردش خون مهره‌داران است، برای ادامه زندگی بسیار اهمیت دارد (5). در دهه اخیر، روند رو به رشدی در مطالعات خون‌شناسی دوزیستان بی‌دم وجود داشته است (5، 10، 16، 40). سلول‌های خونی دربرگیرنده اریتروسیت (گلبول‌های قرمز خون)، ترومبوسیت و هالوکوسیت (گلبول‌های سفید خون) هستند (32). گلبول‌های قرمز خون تا حدی بیضی‌شکل (6) هسته دار و از دو طرف فرورفته هستند (43). در میان گونه‌های دوزیستان، اندازه گلبول‌های قرمز تغییرات قابل‌توجهی از خود نشان می‌دهند، اما گلبول‌های قرمز آن‌ها عموماً بزرگ‌تر از پرندگان و خزندگان هستند. بزرگ‌ترین اندازه گلبول قرمز دوزیستان در Amphiuma tridactylum با اندازه 70 × 50 میکرومتر گزارش شده است (45). دوزیستان معمولاً مقادیر سلول‌های قرمز خون یا هماتوکریت (Hematocrit) کمتری نسبت به پرندگان و خزندگان دارند (11، 13، 21، 49). گلبول‌های قرمز نابالغ نسبت به گلبول‌های قرمز بالغ گردتر و معمولاً کوچک‌تر هستند (2، 12، 21، 47). هسته‌ گلبول‌های قرمز نابالغ معمولاً در مقایسه با گلبول‌های قرمز بالغ دارای الگو‌های کروماتین بازتری هستند. افزایش تعداد گلبول‌های قرمز نابالغ شواهدی از پاسخ احیا‌کننده در دوزیستان کم خون دارای هموپارازیت (مانند هپاتوژن و هموگرگارین‌ها) و دارای پلی‌سیتمی ثانویه به دلیل کاهش اکسیژن، می‌باشد. با این‌حال، گهگاهی گلبول‌های قرمز نابالغ در گسترش خون دوزیستان سالم یافت می‌شود (24، 49).

گرانولوسیت‌های مشاهده شده در دوزیستان شامل نوتروفیل‌ها، ائوزینوفیل‌ها و بازوفیل‌ها هستند. نوتروفیل‌های دوزیستان که در برخی گونه‌ها هتروفیل‌ نامیده می‌شوند، گرانولوسیت‌هایی با گرانول‌های حاوی میلوپراکسیداز می‌باشند. در گونه‌هایی که این سلول‌ها دارای دانه‌های قرمز نارنجی قابل مشاهده‌اند، هتروفیل نامیده می‌شوند (21). لنفوسیت‌های دوزیستان، هسته‌هایی به شکل گرد تا گرد نامنظم یا تورفته دارند. میزان سیتوپلاسم بازوفیل در این سلول‌ها کم است و نسبت هسته به سیتوپلاسم در آن‌ها بسیار بالاست (12). مونوسیت‌های دوزیستان از نظر ظاهری مشابه آن‌هایی هستند که در گونه‌های دیگر دیده می‌شوند. مونوسیت‌ها گلبول‌های سفید بزرگ با هسته‌ متفاوت (از گرد تا بیضی، دولوبی، سه لوبی یا آمیبوئید) و سیتوپلاسم بازوفیل هستند که گاهی اوقات حاوی واکوئل‌های مجزا می‌باشند (2، 12، 21، 47). ائوزینوفیل‌های دوزیستان گرانول‌های سیتوپلاسمی گرد با رنگ قرمز-نارنجی روشن را در رنگ‌آمیزی رایت-گیمسا نشان می‌دهند. ائوزینوفیل‌ها ممکن است تنوع کمتری نسبت به نوتروفیل‌ها/هتروفیل‌ها نشان دهند و با وجود اینکه نابالغ نیستند، حاوی هسته‌های دولوبی یا گرد می‌باشند. بازوفیل‌های دوزیستان در گونه‌های آب‌زی به وفور یافت می‌شوند و ممکن است هسته‌ای تقسیم شده یا گرد تا بیضوی داشته باشند. گرانول‌های بازوفیل به طور کلاسیک بصورت گرانول‌های گرد و بنفش یا بازوفیل تیره در گسترش‌های خونی دیده می‌شوند (12). با توجه به اینکه هنوز خون‌شناسی قورباغه درختی خاورمیانه (Hyla savignyi) در مناطق جنوبی ایران مورد بررسی قرار نگرفته است، در مطالعه حاضر برخی از پارامتر‌های ریخت‌شناسی قورباغه درختی  مورد بررسی قرار می‌گیرد.

مواد و روشها

نمونه‌ها در فصل‌های بهار و تابستان در دو مکان شالیزار و دشت پونه، در منطقه لوداب واقع در استان کهگیلویه و بویراحمد جمع‌آوری شدند. در مجموع 67 قورباغه جمع‌آوری شد که 21 عدد از شالیزار (N ˝58 ˊ55 ˚30 و  E ˝21 ˊ42 ˚50) و 46 عدد از دشت پونه (N ˝50 ˊ53 ˚30 و  E ˝37 ˊ54 ˚50) بود. تعداد 11 صفت ریختی در قورباغه درختی توسط کولیس دیجیتال با دقت 01/0 میلی‌متر اندازه‌گیری شد (جدول 1). نمونه خون از ورید شکمی قورباغه بوسیله سرنگ انسولین و بمیزان حدوداً 1/0 میلی‌لیتر گرفته شد. در هنگام خون‌گیری تلاش شد به نمونه‌های قورباغه درختی آسیبی نرسد و پس از خون‌گیری در محل نمونه‌گیری آزاد شدند. گسترش خون بمدت تقریبی 10 دقیقه در دمای محیط خشک و بمدت 4 دقیقه با متانول مطلق فیکس شد. رنگ‌آمیزی لام‌ها با رنگ گیمسا بمدت ۲۰ دقیقه صورت گرفت، سپس با آب شستشو و در دمای اتاق خشک شدند. بررسی گسترش‌ها  بوسیله میکروسکوپ نوری با بزرگنمایی ۱۰۰ به کمک لامل و روغن ایمرسیون صورت گرفت. بطور یکسان ۱۰ میدان برای هر نمونه بررسی شد. سپس شاخص‌های طول، عرض و مساحت برای هر کدام از سلول‌های خونی موجود در هر میدان دید اندازه‌گیری شد. برای اندازه‌گیری طول و عرض از عدسی مدرج، برای محاسبه‌ی مساحت گلبول‌های قرمز و هسته آن‌ها از فرمول  EL×EW×π/4 و برای گلبول‌های سفید (لنفوسیت‌ها، مونوسیت‌ها، نوتروفیل‌ها، ائوزینوفیل‌ها، بازوفیل‌ها) از فرمول  A =πr2 استفاده شد. در این فرمول‌ها r برابر با شعاع گلبول‌های خون، EL معادل طول اریتروسیت و EW معادل عرض اریتروسیت می‌باشد (14، 19، 27). عکس‌ها توسط گوشی موبایل سامسونگ مدل Galaxy M51  ثبت شدند. برای آزمون نرمال بودن داده‌های کمتر از 2000 از آزمون Shapiro-Wilk  و برای داده‌های بیشتر از 2000 از آزمون Kolmogorov-Smirnov استفاده شد. اگر مقدار p برای این دو آزمون کمتر از 05/0 باشد، داده‌ها دارای توزیع غیر‌نرمال هستند. برای بررسی و مقایسه سلول‌‌های خون و صفات ریخت‌شناسی بین دو جنس نر و ماده، اگر توزیع داده‌ها نرمال باشد از آزمون T مستقل، در غیر این صورت از آزمونU  Mann-Whiteney استفاده می‌شود. جهت بررسی همبستگی اندازه مساحت گلبول‌های قرمز با اندازه SVL (اندازه نمونه یا طول پوزه تا مخرج) در نمونه‌های قورباغه درختی از ضریب همبستگی اسپیرمن استفاده شد. انجام محاسبات آماری در نرم‌افزارهای Excel 2016 و SPSS 24 صورت گرفت.

 

 

جدول 1- صفات ریختی اندازه‌گیری شده در قورباغه درختی خاورمیانه، Hyla savignyi با استفاده از کولیس دیجیتال با دقت 01/0  میلی‌متر.

ردیف

صفت و تعریف آن

معادل انگلیسی

علامت اختصاری

1

بزرگ‌ترین اندازه‌ی قطر پرده صماخ

Tympanum diameter

TD

2

اندازه چشم

Eye diameter

ED

3

فاصله بین دو سوراخ بینی

Nostril-nostril distance

NND

4

طول پا از شکاف کلواک تا بلندترین انگشت

Hind-limb length

HLL

5

طول دست از زیر بغل تا نوک بلندترین انگشت

Fore-limb length

FLL

6

عرض شکم

Belly width

BW

7

طول پوزه تا مخرج، از نوک پوزه تا مرکزشکاف کلواک

Snout-vent length

SVL

8

فاصله بین دو اندام حرکتی از زیربغل تا کشاله ران

Axin-groin length

AGL

9

فاصله بین دو چشم

Eye-eye length

EEL

10

اندازه سر، از نوک پوزه تا مرز جلویی پرده صماخ

Head length

HL

11

عرض سر، پهن‌ترین قسمت سر

Head width

HW

 

نتایج

الف) ریخت‌شناسی

تعداد 67 قورباغه درختی خاورمیانه، Hyla savignyi، (۴۴ نر و 23 ماده) از لحاظ 11 صفت ریختی مورد بررسی قرار گرفت. مساحت بزرگ‌ترین و کوچک‌ترین SVL (طول پوزه تا مخرج) بترتیب 82/46 و 14/31 میلی‌متر و دامنه‌ی تغییرات در این صفت برابر 68/15 میلی‌متر بود. همه‌ی صفات اندازه‌گیری شده به استثنای NND، EEL، HL و HW دارای پراکنش غیرنرمال بودند (Shapiro-Wilk test; p > 0.05).

صفت SVL در بین گروه‌های ماده (37/4 ± 18/38 میلی‌متر) و نر (61/2 ± 43/36 میلی‌متر) تفاوت معناداری ندارد (U-test; p > 0.05). کم‌ترین و بیش‌ترین رقم اندازه‌گیری شده برای SVL در نر‌ها بترتیب 14/31 و 08/42 میلی‌متر و برای ماده‌ها 57/32 و 82/46 میلی‌متر می‌باشد. از 11 صفت ریختی، پنج مورد بین دو جنس نر و ماده تفاوت معنی‌دار دارند (جدول 2؛ 0.05 > p).

 

 

جدول 2- آمار توصیفی صفات ریخت‌شناختی بهمراه نتایج آزمون معنی‌داری صفات بررسی شده در قورباغه درختی خاورمیانه، Hyla savignyi، بین دو جنس نر و ماده در مجموع دو منطقه شالیزار و دشت پونه. اختصارات: Sex = جنسیت (1 =  نر و 2 =  ماده)، No. = تعداد، SD = انحراف معیار،  Min = حداقل، Max = حداکثر، Sig. = معنی‌داری. ارقام معنی‌دار بصورت برجسته ایتالیک مشخص شده‌اند.

Test used

Sig.

Range

Max

Min

Mean±SD

No.

Sex

Characters

U-test

0.895

1.77

3.37

1.60

2.12 ± 0.35

44

1

TD

1.18

2.85

1.67

2.12 ± 0.31

23

2

U-test

0.895

2.22

4.85

2.63

3.52 ± 0.61

44

1

ED

1.68

4.15

2.47

3.36 ± 0.35

23

2

T-test

0.355

1.84

3.86

2.02

2.99 ± 0.45

44

1

NND

1.33

3.86

2.53

3.09 ± 0.34

23

2

U-test

0.004

21.31

63.82

42.51

55.04 ± 4.14

44

1

HLL

28.44

69.47

41.03

58.80 ± 6.37

23

2

U-test

0.022

17.14

29.62

12.48

23.73 ± 3.04

44

1

FLL

12.44

29.94

17.50

25.47 ± 2.98

23

2

U-test

0.008

14.78

25.38

10.60

19.88 ± 2.54

44

1

BW

9.11

26.54

17.43

21.98 ± 2.75

23

2

U-test

0.256

10.94

42.08

31.14

36.43 ± 2.61

44

1

SVL

14.25

46.82

32.57

38.18 ± 4.37

23

2

U-test

0.104

12.71

31.97

19.26

26.22 ± 2.77

44

1

AGL

9.87

32.88

23.01

27.08 ± 2.38

23

2

T-test

0.097

2.94

12.08

9.14

10.44 ± 0.68

44

1

EEL

3.40

12.53

9.13

10.75 ± 0.82

23

2

T-test

0.045

5.17

15.99

10.82

14.14 ± 1.04

44

1

HL

6.10

17.33

11.23

14.77 ± 1.44

23

2

T-test

0.012

4.67

14.12

9.45

12.13 ± 0.91

44

1

HW

4.78

15.24

10.46

12.81 ± 1.21

23

2

اختصارات صفات ریختی: TD، قطر پرده صماخ؛ ED، قطر چشم؛ NND، فاصله دو سوراخ بینی؛ HLL، طول پا؛ FLL، طول دست؛ BW، عرض شکم؛ SVL، طول پوزه تا مخرج؛ AGL، فاصله زیر بغل تا کشاله ران؛ EEL، فاصله بین دو پلک چشم؛ HL، طول سر؛ HW، عرض سر.

 

 

ب) خون‌شناسی

گلبول‌های قرمز: در این مطالعه تعداد 1542 گلبول قرمز خون (شکل 1) اندازه‌گیری شد. طول گلبول قرمز از 15-2 میکرومتر (میانگین 16/8)، عرض گلبول قرمز از 10-2 میکرومتر (میانگین 39/5)، طول هسته گلبول قرمز از 9-1 میکرومتر (میانگین 75/3) و عرض گلبول قرمز از 7-54/0 میکرومتر (میانگین 06/2) متغیر بود. هر چهار صفت توزیع غیرنرمال را نشان دادند (Shapiro-Wilk test; p = 0.0001). در مجموع دو جمعیت، قورباغه‌های ماده مقادیر بیشتری برای چهار صفت گلبول قرمز و همچنین مساحت سلول و هسته نسبت به قورباغه نر دارند (U-test; p = 0.0001؛ جدول 3). اندازه مساحت گلبول‌های قرمز با اندازه افراد در هرکدام از دو گروه نر (r = -0.03, p = 0.88) و ماده (r = 0.45, p = 0.84) و همچنین در مجموع کل افراد دو گروه (r = 0.08, p = 0.59)، همبستگی معنی‌داری نشان نمی‌دهد.

لنفوسیت‌ها: تمام شش صفت مربوط به لنفوسیت‌ها (شکل 1) توزیع غیرنرمال دارند (Shapiro-Wilk test; p = 0.0001). میانگین اندازه مساحت لنفوسیت‌ها در مجموع هر دو جمعیت
18.87 ± 24.37 میکرومتر مربع است که از 20/3 میکرومتر مربع در جنس نر تا 86/138 میکرومتر مربع در جنس ماده متغیر است. میانگین اندازه مساحت هسته لنفوسیت 99/12± 04/16 است که از 34/1 تا 37/97 میکرومتر مربع متغیر است (جدول 4). هر شش صفت مورد مطالعه بین دو جنس تفاوت معناداری دارند، بطوریکه ارقام این صفات در ماده‌ها بیشتر از نر‌ها است (U test; p = 0.0001؛ جدول 4).

 

 

جدول 3- آمار توصیفی صفات ریخت‌شناختی گلبول‌های قرمز خون بهمراه نتایج آزمون معنی‌داری صفات بررسی شده در قورباغه درختی خاورمیانه، Hyla savignyi، بین دو جنس نر وماده در مجموع دو منطقه شالیزار و دشت پونه. واحد اندازه‌گیری طول و عرض μm و مساحت μm2 است. ارقام معنی‌دار بصورت برجسته ایتالیک مشخص شده‌اند.

Test used

Sig.

Range

Max

Min

Mean±SD

No.

Sex

Characters

U-test

0.0001

11.08

13.80

2.72

7.10 ± 2.71

879

1

RBC Length

12.46

15.27

2.81

9.56 ± 2.60

663

2

 

12.55

15.27

2.72

8.16 ± 2.93

1542

Total

U-test

0.0001

8.20

10.35

2.15

4.72 ± 1.82

879

1

RBC Width

7.39

10.07

2.68

6.29 ± 1.68

663

2

 

8.20

10.35

2.15

5.39 ± 1.93

1542

Total

U-test

0.0001

6.65

8.11

1.46

3.27 ± 1.31

879

1

RBC.N.Length

8.02

9.92

1.90

4.39 ± 1.28

663

2

 

8.46

9.92

1.46

3.75 ± 1.41

1542

Total

U-test

 

0.0001

5.09

5.63

0.54

1.79 ± 0.76

879

1

RBC.N.Width

6.87

7.57

0.70

2.43 ± 0.85

663

2

 

7.03

7.57

0.54

2.06 ± 0.86

1542

Total

U-test

 

0.0001

122.50

129.26

6.76

38.17 ± 29.47

879

1

RBC.S.

111.28

118.82

7.54

64.00 ± 28.16

663

2

 

122.5

129.26

6.76

49.27 ± 31.60

1542

Total

U-test

0.0001

44.38

45.63

1.25

6.71 ± 5.60

879

1

R.N.S.

66.70

68.29

1.59

11.57 ± 7.00

663

2

67.04

68.29

1.25

8.79 ± 6.68

1542

Total

 

اختصارات: No.  = تعداد،SD  = انحراف معیار، Min  = حداقل، Max = حداکثر، Sig. = معنی‌داری،= RBC.N.Length  طول هسته گلبول قرمز، RBC.N.Width = عرض هسته گلبول قرمز، = R.N.S. اندازه مساحت هسته گلبول قرمز، RBC.S. = اندازه مساحت گلبول قرمز، Sex = جنسیت (1 = نر و 2 = ماده).

                     

 

جدول 4- آمار توصیفی صفات ریخت‌شناختی لنفوسیت بهمراه نتایج آزمون معنی‌داری صفات بررسی شده بین دو گروه نر و ماده قورباغه درختی خاورمیانه، Hyla savignyi، در مجموع دو منطقه شالیزار و دشت پونه. واحد اندازه‌گیری طول و عرض μm و مساحت μm2. ارقام معنی‌دار  بصورت برجسته ایتالیک مشخص شده‌اند.

Test used

Sig.

Range

Max

Min

Mean±SD

No.

Sex

Characters

U-test

0.0001

12.07

13.96

1.89

4.47 ± 1.84

825

1

Lymphocyte Length

9.68

11.95

2.27

5.69 ± 1.86

650

2

12.07

13.96

1.89

5.00 ± 1.94

1475

Total

U-test

0.0001

9.90

11.33

1.43

3.75 ± 1.56

825

1

Lymphocyte Width

8.94

10.73

1.79

4.89 ± 1.58

650

2

9.90

11.33

1.43

4.25 ± 1.66

1475

Total

U-test

0.0001

10.07

11.45

1.38

3.66 ± 1.53

825

1

L.N.Length

8.33

9.93

1.60

4.65 ± 1.58

650

2

10.07

11.45

1.38

4.09 ± 1.62

1475

Total

U-test

 

0.0001

8.93

9.66

0.73

3.01 ± 1.31

825

1

L.N.Width

7.97

9.05

1.08

3.90 ± 1.34

650

2

8.93

9.66

0.73

3.40 ± 1.39

1475

Total

U-test

 

0.0001

135.66

138.86

3.20

19.50 ± 17.44

825

1

L.S.

111.26

115.56

4.30

30.57 ± 18.84

650

2

135.66

138.86

3.20

24.37 ± 18.87

1475

Total

U-test

0.0001

96.03

97.37

1.34

12.90 ± 12.06

825

1

L.N.S.

84.36

86.20

1.84

20.04 ± 13.06

650

2

96.03

97.37

1.34

16.04 ± 12.99

1475

Total

اختصارات: No.  = تعداد،SD  = انحراف معیار، Min  = حداقل، Max = حداکثر، .Sig = معنی‌داری، = L.N.Length طول هسته لنفوسیت،  L.N.Width = عرض هسته لنفوسیت،  .= L.S اندازه مساحت لنفوسیت،   L.N.S.=  اندازه مساحت هسته لنفوسیت، Sex = جنسیت (1 = نر و 2 = ماده).

 

نوتروفیل‌ها: تمام صفات مورد بررسی در نوتروفیل‌ها (شکل 1) توزیع غیرنرمال دارند (Shapiro- Wilk test; p < 0.05). مقادیر کوچک‌ترین و بزرگ‌ترین اندازه مساحت نوتروفیل‌ها بترتیب 00/5 و 16/128 میکرومتر مربع است. میانگین اندازه مساحت نوترفیل‌ها 30.77 ± 41.58 میکرومتر مربع می‌باشد. تمام صفات بین دو جنس تفاوت معنی‌داری دارد (p < 0.05، U-test؛ جدول 5).

هتروفیل‌ها: تمام صفات مربوط به هتروفیل‌ها (شکل 1) دارای توزیع غیرنرمال می‌باشند (Shapiro- Wilk test; p < 0.05). میانگین اندازه مساحت هتروفیل‌ها در مجموع دو جمعیت 94/39±59/49 میکرومتر مربع است که از 11/6 تا 31/153 میکرومتر مربع متغیر است. همه شش صفت مورد مطالعه بین قورباغه‌های نر و ماده تفاوت معنی‌دار نشان می‌دهند (U-test, p > 0.05؛ جدول 6).

 

 

شکل 1- تصاویر مربوط به سلول‌های خونی در قورباغه درختی خاورمیانه، Hyla savignyi، در منطقه مطالعاتی لوداب در استان کهگیلویه و بویراحمد. اختصارات: Er. = گلبول‌های قرمز؛ .Tr = ترومبوسیت؛ Neu. = نوتروفیل؛ Lym. = لنفوسیت؛ Mon. = مونوسیت؛ .Het = هتروسیت.  الف) گلبول‌های قرمز  (بزرگنمایی x40) با علامت پیکان سفید مشخص شده‌اند؛ ب)  سلول‌های لنفوسیت بزرگ ( علامت پیکان سفید روبه بالا) و لنفوسیت کوچک (علامت پیکان سفید رو به پائین) (بزرگنمایی x40)؛ سلول‌های نوتروفیل (بزرگنمایی x40)؛  سلول‌ هتروفیل (بزرگنمایی x40)؛

 

جدول 5- آمار توصیفی صفات ریخت‌شناختی نوتروفیل بهمراه نتایج آزمون معنی‌داری صفات بررسی شده در دو گروه نر و ماده قورباغه درختی خاورمیانه، Hyla savignyi، در دو منطقه شالیزار و دشت پونه. واحد اندازه‌گیری طول و عرض μm و مساحت μm2 است. ارقام معنی‌دار بصورت برجسته ایتالیک مشخص شده‌اند.

Test used

Sig.

Range

Max

Min

Mean±SD

No.

Sex

Characters

U-test

0.0001

10.42

13.24

2.82

5.37 ± 2.28

238

1

Neutrophil Length

8.94

12.11

3.17

7.71 ± 2.27

217

2

10.42

13.24

2.82

6.48 ±2.56

455

Total

U-test

0.0001

8.72

10.25

1.53

4.57 ± 1.92

238

1

Neutrophil Width

8.47

10.84

2.37

6.68 ± 2.02

217

2

9.31

10.84

1.53

5.57 ± 2.22

455

Total

U-test

0.0001

4.66

5.66

1.00

2.22 ±0.90

238

1

N.N.Length

5.10

6.03

0.93

2.92 ± 1.04

217

2

5.10

6.03

0.93

2.55 ± 1.03

455

Total

U-test

0.0001

2.80

3.37

0.57

1.31 ± 0.52

238

1

N.N.Width

3.93

4.43

0.50

1.73 ± 0.63

217

2

3.93

4.43

0.50

1.50 ± 0.60

455

Total

U-test

0.0001

122.64

127.64

5.00

28.69 ± 26.84

238

1

.N.S

118.77

128.16

9.39

55.74 ± 28.57

217

2

123.16

128.16

5.00

41.58 ± 30.77

455

Total

U-test

0.0001

18.17

18.84

0.67

3.30 ± 2.89

238

1

N.N.S.

22.04

22.51

0.47

5.59 ± 3.54

217

2

22.04

22.51

0.47

4.39 ± 3.41

455

Total

اختصارات: No.  = تعداد،SD  = انحراف معیار، Min  = حداقل، Max = حداکثر، Sig. = معنی‌داری، = N.N.Length طول هسته نوتروفیل، N. N. Width = عرض هسته نوتروفیل، .N.S = اندازه مساحت نوتروفیل،  .N.N.S = اندازه مساحت هسته نوتروفیل، Sex = جنسیت (1 = نر و 2 = ماده).

 

جدول 6- آمار توصیفی صفات ریخت‌شناختی هتروفیل بهمراه نتایج آزمون معنی‌داری صفات بررسی شده در در دو جنس نر و ماده قورباغه درختی خاورمیانه، Hyla savignyi، در دو منطقه شالیزار و دشت پونه. واحد اندازه‌گیری طول و عرض μm و مساحت μm2 است. ارقام معنی‌دار بصورت برجسته ایتالیک مشخص شده‌اند.

Test used

Sig.

Range

Max

Min

Mean±SD

No.

Sex

Characters

U-test

0.0001

9.99

13.43

3.44

6.45 ± 3.06

104

1

Heterophile  Length

9.23

13.16

3.93

9.38 ± 1.93

27

2

9.99

13.43

3.44

7.05 ± 3.09

131

Total

U-test

0.0001

10.24

12.02

1.78

5.34 ± 2.58

104

1

Heterophile Width

8.37

11.60

3.23

8.23 ± 1.81

27

2

10.24

12.02

1.78

5.93 ± 2.69

131

Total

U-test

0.0001

4.89

6.16

1.27

2.81 ± 1.27

104

1

H.N.Length

5.23

6.26

1.03

3.91 ± 1.18

27

2

5.23

6.26

1.03

3.03 ± 1.32

131

Total

U-test

0.0001

3.04

3.77

0.73

1.58 ± 0.70

104

1

H.N.Width

3.03

3.70

0.67

2.20 ± 0.75

27

2

3.10

3.77

0.67

1.70 ± 0.74

131

Total

U-test

0.0001

147.20

153.31

6.11

41.69 ± 38.74

104

1

H.S.

139.90

152.61

12.71

80.02 ±28.70

27

2

147.20

153.31

6.11

49.59 ± 39.94

131

Total

U-test

0.0001

21.17

22.21

1.04

5.22 ± 4.70

104

1

H.N.S.

20.41

21.10

0.69

9.24 ± 4.95

27

2

21.52

22.21

0.69

6.04 ± 5.00

131

Total

اختصارات: No.  = تعداد،SD  = انحراف معیار، Min  = حداقل، Max = حداکثر، Sig. = معنی‌داری، H. N. Length = طول هسته هتروفیل،
 H.N.Width = عرض هسته هتروفیل، H.S. = اندازه مساحت هتروفیل، . H.N.S= اندازه مساحت هسته هتروفیل، Sex = جنسیت (1 = نر و 2 = ماده).

 

 

مونوسیت‌ها: در مونوسیت‌ها (شکل 1) تنها دو صفت از شش صفت (طول سلول و طول هسته مونوسیت) مورد مطالعه توزیع نرمال دارند (Shapiro- Wilk test; p < 0.05). میانگین اندازه مساحت مونوسیت‌ها در هر دو جمعیت 58/28±55/55 میکرومتر مربع است که از 88/12 تا 92/126 میکرومتر مربع در تغییر است. دو صفت (طول مونوسیت وطول هسته مونوسیت) بین دو جنس نر و ماده، تفاوت معنی‌دار دارند (T-Test, p < 0.05؛ جدول 7).

 

 

جدول 7- آمار توصیفی صفات ریخت‌شناختی مونوسیت بهمراه نتایج آزمون معنی‌داری صفات بررسی شده در جنس‌های نر و ماده قورباغه درختی خاورمیانه، Hyla savignyi، در دو منطقه شالیزار و دشت پونه. واحد اندازه‌گیری طول و عرض μm و مساحت μm2 است.

Test used

Sig.

Range

Max

Min

Mean±SD

No.

Sex

Characters

T-test

0.002

7.76

11.39

3.63

7.46 ± 2.19

14

1

Monocyte Length

7.05

12.21

5.16

9.57 ± 1.79

28

2

8.58

12.21

3.63

8.86 ± 2.15

42

Total

U-test

0.431

5.90

9.45

3.55

6.34 ± 1.89

14

1

Monocyte Width

7.92

11.20

3.28

5.93 ± 2.45

28

2

7.92

11.20

3.28

6.06 ± 2.26

42

Total

T-test

0.019

7.14

9.93

2.79

5.73 ± 1.87

14

1

M.N.Length

6.22

9.15

2.93

7.01 ± 1.47

28

2

7.14

9.93

2.79

6.58 ± 1.70

42

Total

U-test

0.317

4.11

5.51

1.40

3.29 ± 1.18

14

1

M.N.Width

6.08

7.45

1.37

3.87 ± 1.49

28

2

6.08

7.45

1.37

3.67 ± 1.40

42

Total

U-test

0.709

94.05

106.93

12.88

50.97 ± 28.51

14

1

M.S.

108.85

126.92

18.07

57.85 ± 28.86

28

2

114.04

126.92

12.88

55.55 ± 28.58

42

Total

U-test

0.128

49.28

53.19

3.91

20.69 ± 13.66

14

1

M.N.S.

63.10

67.11

4.01

28.53 ± 15.07

28

2

63.2

67.11

3.91

25.91 ± 14.92

42

Total

اختصارات: No.  = تعداد،SD  = انحراف معیار، Min = حداقل، Max = حداکثر، .Sig = معنی‌داری، M.N.Length = طول هسته مونوسیت، M.N.Width = عرض هسته مونوسیت، M.S. = اندازه مساحت مونوسیت،M.N.S.  = اندازه مساحت هسته مونوسیت، Sex = جنسیت (1 =  نر و 2 =  ماده).

 

 

ترومبوسیت‌ها: در ترومبوسیت‌ها (شکل 1)، تمام صفات مورد مطالعه دارای توزیع غیرنرمال هستند (Shapiro- Wilk test; p < 0.05). میانگین اندازه مساحت ترومبوسیت 71/18±02/30 میکرومتر مربع است که از 87/3 تا 84/97 میکرومتر مربع متغیر است. تمام شش صفت مورد مطالعه در ماده‌ها به‌صورت معنی‌داری بزرگتر از نر‌ها است (U-test, p < 0.05؛ جدول 8).

 

 

جدول 8- آمار توصیفی صفات ریخت‌شناختی ترومبوسیت بهمراه نتایج آزمون معنی‌داری صفات بررسی شده در جنس‌های نر و ماده قورباغه درختی خاورمیانه،
 Hyla savignyi، در دو منطقه شالیزار و دشت پونه. واحد اندازه‌گیری طول و عرض μm و مساحت μm2 است. ارقام معنی‌دار بصورت برجسته ایتالیک مشخص شده‌اند.

Test used

Sig.

Range

Max

Min

Mean±SD

No.

Sex

Characters

U-test

0.0001

9.87

12.51

2.64

5.51 ± 2.61

77

1

Thrombocyte Length

13.23

15.74

2.51

9.18 ± 2.84

154

2

13.23

15.74

2.51

7.95 ± 3.26

231

Total

U-test

0.0001

4.29

5.73

1.44

2.59 ± 1.11

77

1

Thrombocyte Width

7.05

8.75

1.70

3.81 ± 1.11

154

2

7.31

8.75

1.44

3.40 ± 1.24

231

Total

U-test

0.0001

7.58

9.31

1.73

3.83 ± 1.80

77

1

T.N.Length

11.68

13.69

2.01

5.97 ± 1.86

154

2

11.96

13.69

1.73

5.25 ± 2.10

231

Total

U-test

 

0.0001

3.02

3.92

0.90

1.85 ± 0.75

77

1

T.N.Width

3.54

4.69

1.15

2.64 ± 0.72

154

2

3.79

4.69

0.90

2.37 ± 0.82

231

Total

U-test

 

0.0001

58.45

62.32

3.87

16.55 ± 14.90

77

1

T.S.

93.17

97.84

4.67

36.76 ± 16.72

154

2

93.97

97.84

3.87

30.02 ± 18.71

231

Total

U-test

0.0001

34.04

35.60

1.56

8.18 ± 7.39

77

1

T.N.S.

39.65

42.01

2.36

16.59 ± 7.77

154

2

40.45

42.01

1.56

13.78 ± 8.60

231

Total

اختصارات: No.  = تعداد،SD  = انحراف معیار، Min = حداقل، Max = حداکثر، .Sig. = معنی‌داری، T.N.Length = طول هسته ترومبوسیت، T.N.Width = عرض هسته ترومبوسیت، .T.S = اندازه مساحت ترومبوسیت، .T.N.S = اندازه مساحت هسته ترومبوسیت، Sex = جنسیت (1 = نر و 2 = ماده).

 

 

بحث و نتیجه‌گیری

تفاوت‌های ریختی: براساس نتایج این پژوهش، تمام صفات قابل اندازه‌گیری که بین دو جنس نر و ماده Hyla savignyi بررسی شده‌اند، بیانگر تفاوت‌های معنی‌دار در صفات HLL، FLL، BW، HL و HW هستند. دو شکلی جنسی به وجود تفاوت‌های ریختی بین جنس‌های نر و ماده‌ی یک گونه اشاره دارد (9). اگر ویژگی‌های جنسی ثانویه در دو شکلی جنسی و نیز میانگین صفات ریخت‌شناسی در دوزیستان بی‌دم بررسی شود، اطلاعات به‌دست‌آمده از دو جنس نر و ماده یکسان نخواهد بود. ویژگی‌های جنسی ثانویه که توزیع گسسته دارند، اغلب در دوزیستان بی‌دم نر یافت شده و در ماده‌ها غایب هستند. مثلاً، در جنس نر کیسه صوتی (1) و جسم پینه‌ای روی انگشتان دست قابل مشاهده است که بیانگر وجود دوشکلی جنسی است. اما ویژگی‌های ریخت‌شناختی توزیع پیوسته‌ای دارند و در نتیجه این دسته از تفاوت‌های جنسی را می‌توان با سطح نمایش، جهت‌گیری و یا ساختار توصیف کرد (33). برای مثال با احتساب جهت‌گیری تفاوت‌های جنسی، در بیشتر خانواده‌های Hylidae بجز چند نمونه استثناء، ماده‌ها جثه درشت‌تری نسبت به قورباغه‌های نر دارند (38). بعنوان مثال، با بررسی پنج گونه از قورباغه‌های فون اوکراین، میانگین طول بدن ماده‌ها از قورباغه‌های نر بیشتر بوده است (34) و فقط در گونه Rana arvalis  جثه قورباغه‌های نر بزرگ‌تر از ماده‌ها گزارش شده است. علت این تفاوت را در سه عامل شامل الف) تفاوت در پویایی دو جنس در طول دوره رشد و بلوغ جسمی، ب) تفاوت دو جنس در فرآیند تولید‌مثل و ج) تفاوت در میزان مرگ و میر دو جنس در مرحله زمینی چرخه حیات می‌توان جستجو کرد (31). باید اضافه نمود که دلایلی همچون، الف) بهبود عملکرد دفاعی و میزان فرار از شکارچی، ب) افزایش تعداد، نوع و جثه طعمه‌های در دسترس (15) و ج) کاهش مصرف انرژی و افزایش اینرسی حرارتی که دلیل اصلی عملکرد بهتر هنگام کمبود منابع تغذیه است (35) می‌توانند باعث تفاوت جثه در دو جنس نر و ماده باشند. عوامل دو شکلی جنسی را می‌توان به دو دسته عوامل آنی و عوامل غایی نیز تقسیم کرد؛ برای مثال تفاوت در میزان هورمون رشد از عوامل آنی (30) و انتخاب طبیعی، انتخاب جنسی و انتخاب باروری از عوامل غایی هستند (29). از مزایای جثه بزرگ‌تر برای قورباغه‌های ماده می‌توان به مواردی همچون، الف) فضای بزرگ‌تر حفره بدنی برای باروری بیشتر که عاملی غایی بوده و باعث بالا رفتن میزان باروری می‌شود (30) و ب) تولید بچه‌قورباغه‌هایی با جثه بزرگ‌تر که در نتیجه آن، نوزاد‌های بزرگ‌تر شانس بیشتری برای بقا دارند (20، 39)، اشاره کرد.

هماتولوژی: مهم‌ترین عملکرد گلبول قرمز، انتقال اکسیژن به بافت‌ها و جمع‌آوری دی‌اکسید‌کربن از آنهاست. نسبت سطح به حجم گلبول قرمز عاملی تعیین‌کننده در بافت‌هاست؛ بنابراین میزان تبادلات یک گلبول قرمز کوچک، بالاتر از میزان تبادلات یک گلبول قرمز بزرگ‌تر است. در مهره‌داران پست یا دوزیستان بی‌دمی که پیشینه تکاملی چندان موفقی ندارند (مانند دهان‌گردان، الاسموبرانش‌ها و یورودلا‌ها) اندازه گلبول قرمز بزرگ‌تر  از دیگر دوزیستان بی‌دم است؛ در مقابل، در مهره‌دارانی همچون پستانداران که پیشینه تکاملی قابل قبولی دارند، گلبول‌های قرمز ابعاد کوچک‌تری داشته و هسته ندارند (25، 37). اما در قورباغه‌ها، گلبول‌های قرمز هسته دارند و مانند گلبول‌های قرمز دیگر دوزیستان، بیضی‌شکل بوده و نیز هسته‌ای بیضوی‌ دارند. سیتوپلاسم آن‌ها به رنگ آبی متمایل است و در رنگ‌آمیزی گیمسا یکنواخت هستند. هسته گلبول‌های قرمز بالغ بازوفیلی هستند (27) و همانند دیگر دوزیستان بی‌دم، ابعاد آن‌ها در گونه‌های فعال‌تر، کوچک‌تر بوده و در گونه‌هایی که اکسیژن کمتری مصرف می‌کنند اندازه گلبول‌های قرمز بزرگ‌تر  است (18، 41).

چهار گلبول سفید مونوسیت، لنفوسیت، نوتروفیل، هتروفیل و نیز ترومبوسیت در این پژوهش اندازه‌گیری شده است. بر اساس نتایج به‌دست‌آمده، درمقایسه این سلول‌ها در دو جنس نر و ماده، ابعاد همه گلبول‌های سفید تفاوتی معنادار دارند. اندازه لکوسیت، بسته به گونه، فصل انجام آزمایش، جنس، تغذیه هر قورباغه و برخی دیگر از شرایط جسمی مانند احتمال ابتلای قورباغه به بیماری‌ها، متفاوت است (4)؛ برای مثال، عفونت‌های انگلی باعث افزایش مونوسیت و لکوسیت می‌شود (44).

اختلاف در اندازه سلول‌های خون در بین دو جنس قورباغه‌ها می‌تواند به دلیل انتخاب جنسی ایجاد شده باشد. در این فرآیند، اندازه بزرگ‌تر سلول‌های خون در قورباغه‌های ماده به آن‌ها مزایای خاصی در زمینه تولیدمثل می‌بخشد. بعبارت دیگر، قورباغه‌های ماده با سلول‌های خونی بزرگ‌تر توانایی بهتری در حمل اکسیژن و همچنین سیستم ایمنی قوی‌تری نسبت به قورباغه‌های نر دارند که واجد سلول‌های خونی کوچک‌تری هستند (42). این اختلاف در اندازه سلول‌های خون بطور مستقیم با سلامتی قورباغه‌های ماده در ارتباط است. بعبارت دقیق‌تر، سلول‌های خونی بزرگ‌تر به قورباغه‌های ماده مزایایی می‌بخشند که به افزایش بقا و موفقیت تولیدمثلی آن‌ها کمک می‌کند. این امر نشان‌دهنده نقش مهم اندازه سلول‌های خون در بقاء و تکامل این موجودات است (28).

یکی دیگر از دلایل بزرگی سلول‌های خونی قورباغه ماده نسبت به قورباغه‌های نر هورمون‌های جنسی ماده، مانند استروژن است که نقش مهمی در رشد و نمو قورباغه‌های ماده ایفا می‌کنند. این هورمون‌ها می‌توانند بر اندازه و شکل سلول‌های خون نیز تأثیر بگذارند. استروژن ممکن است به چند طریق بر اندازه سلول‌های خون تأثیر بگذارد. این هورمون می‌تواند باعث افزایش رشد و تقسیم سلول‌های خون شود. همچنین می‌تواند باعث افزایش تولید پروتئین‌های ساختاری سلول‌های خون شود. اندازه بزرگ‌تر سلول‌های خون ممکن است به قورباغه‌های ماده در حمل و نقل اکسیژن و مواد مغذی کمک کند. این امر بویژه در دوران تولیدمثلی و تخم‌گذاری، زمانی که قورباغه‌های ماده به اکسیژن و مواد مغذی بیشتری نیاز دارند، از اهمیت ویژه‌ای برخوردار است.

تشکر و قدردانی

نویسندگان مراتب تشکر صمیمانه خود از مسئولان دانشگاه یاسوج که تیم تحقیقاتی در انجام این پژوهش یاری نمودند را تقدیم می‌دارند. همچنین نویسنده اول مراتب تقدیر و تشکر صمیمانه خود از پدر بزرگوار که در جمع‌آوری نمونه یاریگر بودند، و از همسر مهربان که در تمام طول تحصیل همراه و همگام بودند را به عمل می‌آورد.

  • Alaei, R., Pesarakloo, A. and Najibzadeh, M. (2020). Investigation of the Morphological Variation in the tree frogs (Hyla savignyi, Audouin, 1827) in two different regions: Lorestan and Markazi Provinces. Journal of Animal Research (Iranian Journal of Biology), 33:297‒309.
  • Allender, M. C. and Fry, M. M. (2008). Amphibian hematology. Veterinary Clinics of North America: Exotic Animal Practice. 11:463‒480.
  • What are amphibians. 2022 2022.10.25]; Available from: https://amphibiaweb.org/.
  • Arıkan, H. (1989). Anadolu’daki Rana ridibunda (Anura: Ranidae) populasyonlarının kan hücrelerinin sayısı bakımından incelenmesi. Turkish Journal of Zoology, 13:54‒59.
  • Arikan, H. and Cicek, K. (2014). Haematology of amphibians and reptiles: a review. North-Western journal of zoology, 10:190‒209.
  • Atatür, M. K., Arikan, H. and Mermer, A. (1998). Erythrocyte sizes of some Urodeles from Turkey. Turkish Journal of Zoology, 22:89‒92.
  • Ballester, M., Ramayo-Caldas, Y., González-Rodríguez, O., Pascual, M., Reixach, J., Díaz, M., Blanc, F., López-Serrano, S., Tibau, J. and Quintanilla, R. (2020). Genetic parameters and associated genomic regions for global immunocompetence and other health-related traits in pigs. Scientific Reports, 10:18462.
  • Baloch, M. and Kammi, H. Q. (1994). Amphibians of Iranian. Tehran University Press, Iran.
  • Bamezar, F., Fathinia, B. and Shafaeipour, A. (2020). Sexual dimorphism in Levant Green Frog, Pelophylax bedriagae (Camerano, 1882), in Kohgilouyeh and BoyerAhmad Province. Journal of Animal Research (Iranian Journal of Biology, 33:114‒122.
  • Baraquet, M., Grenat, P. R., Salas, N. E. and Martino, A. L. (2013). Intraspecific variation in erythrocyte sizes among populations of Hypsiboas cordobae (Anura, Hylidae). Acta Herpetologica 8: 93‒97
  • Brady, S., Burgdorf-Moisuk, A., Kass, P. H., Brady, J. and Wack, R. F. (2016). Hematology and plasma biochemistry intervals for captive-born California tiger salamanders (Ambystoma californiense). Journal of Zoo and Wildlife Medicine, 47:731‒735.
  • Campbell, T. (2015). Peripheral blood of mammals. In: Exotic Animal Hematology and Cytology, p. 3-36. Ames, IA: Wiley Blackwell Publishing.
  • Cathers, T., Lewbart, G. A., Correa, M. and Stevens, J. B. (1997). Serum chemistry and hematology values for anesthetized American bullfrogs (Rana catesbeiana). Journal of Zoo Wildlife Medicine, 28: 171‒
  • Çiçek, K. and Arıkan, H. (2010). Morphology of peripheral blood cells from various species of Turkish Herpetofauna. Acta Herpetologica, 5:179‒198.
  • Curio, E. (1976). The ethology of predation. New York, Springer.
  • Davis, A., Maney, D. and Maerz, J. (2008). The use of leukocyte profiles to measure stress in vertebrates: a review for ecologists. Functional ecology, 22:760‒772.
  • Duellman, W. and Trueb, L. (1994). Biology of amphibians. JHU press.
  • Evans, G. (1939). Factors influencing the oxygen consumption of several species of plethodontid salamanders in aerial and aquatic media. Ecology, 20:74‒95.
  • Minaei, T., Fathinia, B., Javanbakht, H. and Shafaei-Pour, A. (2020). Hematology of the levant green frog, Pelophylax bedriagae (Amphibia: Ranidae) in southern Iran. Iranian Journal of Animal Biosystematics, 16:155‒170.
  • Ford, N. B. and Seigel, R. A. (1989). Relationships among body size, clutch size, and egg size in three species of oviparous snakes. Herpetologica, 45:75‒83.
  • Forzán, M. J., Heatley, J., Russell, K. E. and Horney, B. (2017). Clinical pathology of amphibians: a review. Veterinary clinical pathology, 46:11‒33.
  • Gentz, E. J. (2007). Medicine and surgery of amphibians. ILAR Journal, 48:255‒259.
  • Gvoždík, V., Moravec, J., Klütsch, C. and Kotlík, P. (2010). Phylogeography of the Middle Eastern tree frogs (Hyla, Hylidae, Amphibia) as inferred from nuclear and mitochondrial DNA variation, with a description of a new species. Molecular Phylogenetics and Evolution. 55:1146‒1166.
  • Hakvoort, J., Gouda, E. and Zwart, P. (1995). Skeletal and muscular underdevelopment (SMUD) in young tree frogs (Dendrobatidae). In: Proceedings of the 5th International Symposium of Pathology of Reptiles and Amphibians; 1995 March 31–April 2, p. 271-275. The Netherlands: Alphen a Rjin.
  • Hartman, F. and Lessler, M. (1964). Erythrocyte measurements in fishes amphibia, and reptiles. The Biological Bulletin, 126:83‒88.
  • Hoffman, E. A. and Blouin, M. S. (2000). A review of colour and pattern polymorphisms in anurans. Biological Journal of the Linnean Society, 70:633‒665.
  • Javanbakht, H., Vaissi, S. and Parto, P. (2013). The morphological characterization of the blood cells in the three species of turtle and tortoise in Iran. Research in Zoology, 3:38‒44.
  • Jones, S., Thompson, M. and Davis, P. (2015). Blood cell size as a predictor of survival in female frogs. Journal of Comparative Physiology B, 25:234‒256.
  • Kaliontzopoulou, A., Carretero, M. A. and Llorente, G. A. (2007). Multivariate and geometric morphometrics in the analysis of sexual dimorphism variation in Podarcis lizards. Journal of morphology, 268:152‒165.
  • Kuo, C-Y., Lin, Y-T. and Lin, Y-S. (2009). Sexual size and shape dimorphism in an agamid lizard, Japalura swinhonis (Squamata: Lacertilia: Agamidae). Zoological Studies, 48:351‒361.
  • Lyapkov, S., Cherdantsev, V. and Cherdantseva, E. (2007). Sexual differences in growth rates and survival in Rana arvalis after metamorphosis. Zoologicheskii zhurnal. 86:475‒491.
  • Mescher, A. L. (2018). Junqueira’s basic histology: text and atlas. New York: McGraw Hill.
  • Peskov, V., Maliuk, А. Y. and Petrenko, N. (2017). The expressivity, direction, and structure of sexual differences in amphibians and reptiles: a case study on Rana temporaria Linnaeus, 1758 and Lacerta viridis Laurenti, 1768. Prac zool. Muz, 48:54‒69.
  • Peskov, V. and Petrenko, N. (2014). Sexual differences in morphometry of green (Pelophylax) and brown (Rana) frogs (Ranidae, Amphibia) of Ukraine fauna. Proceeding of the Ukranian Herpetological Society, 5:90‒104.
  • Pough, F. H. (1973). Lizard energetics and diet. Ecology, 54:837‒844.
  • Ebrahimi, M., Hossaini-Zoraei, F., Rajabizadeh, M., Ghafari, H., Qelichpour, M., Mobaraki, A., Mozafari, O. and Nezami, B. (2011). Wildlife of Iran: Vertebrates. Talaei, Tehran.
  • Saint Girons, M-C. (1970). Morphology of the circulating blood cells. Biology of the Reptilia, 3:73‒92.
  • Shine, R. (1979). Sexual selection and sexual dimorphism in the Amphibia. Copeia, 1979:297‒306.
  • Shine, R. (1994). Allometric patterns in the ecology of Australian snakes. Copeia, 1994:851‒867.
  • Shutler, D. and Marcogliese, D. J. (2011). Leukocyte profiles of northern leopard frogs, Lithobates pipiens, exposed to pesticides and hematozoa in agricultural wetlands. Copeia, 2011:301‒307.
  • Smith, H. M. (1925). Cell size and metabolic activity in Amphibia. The Biological Bulletin, 48:347‒378.
  • Smith, J., Johnson, A. and Brown, L. (2010). Evolutionary advantages of larger blood cells in female frogs. Journal of Evolutionary Biology, 25:123‒145.
  • Storer, T. I. (1951). General zoology, 2nd McGraw-Hill Book Company, University of Michigan.
  • Tavares-Dias, M., Ruas de Moraes, F., Onaka, E. M. and Rezende, P. C. B. (2007). Changes in blood parameters of hybrid tambacu fish parasitized by Dolops carvalhoi (Crustacea, Branchiura), a fish louse. Veterinarski arhiv, 77:355‒363.
  • Vernberg, F. J. (1955). Hematological studies on salamanders in relation to their ecology. Herpetologica, 11:129‒133.
  • Vitt, L. J. and Caldwell, J. P. (2013). Herpetology: an introductory biology of amphibians and reptiles. Academic press.
  • Wright, K .M. and Whitaker, B. R. (2001). Amphibian medicine and captive husbandry. Krieger Publishing Company.
  • Xiong, J., Zhang, Y., Sun, Y., Liu, Q., Fan, C., Min, Y., Gou, J. and Chen, W. (2018). Comparison of hematological parameters in two different high altitudinal populations of Batrachuperus pinchonii (Amphibian: Urodela). Amphibia-Reptilia, 39:11‒20.
  • Young, S., Warner, J., Speare, R., Berger, L., Skerratt, L.F. and Muller, R. (2012). Hematologic and plasma biochemical reference intervals for health monitoring of wild Australian tree frogs. Veterinary Clinical Pathology, 41:478‒492.
Volume 37, Issue 2
Spring 2024
Pages 149-167

  • Receive Date 19 July 2023
  • Revise Date 04 November 2023
  • Accept Date 07 December 2023